Chemie - Dialýzy
Krásný dobrý večer. Mohl bych se, prosím, zeptat, zda by mi byl někdo schopen poradit s následující úlohou, konkrétně s body a), c) a f)? Prošel jsem totiž vícero skript v českém i anglickém jazyce a informace v nich obsažené mi místy přijdou dosti protichůdné. Předem moc děkuji za případnou pomoc. Hezký večer. :)
Máte směs proteinu (≈50 kDa) a malého inhibitoru (≈100 Da). Chcete inhibitor odstranit dialýzou.
a) Zvolte membránu (MWCO) a jednou větou zdůvodni výběr.
b) Nakreslete jednoduché schéma (sáček ↔ dialyzát) a napište, co je driving force.
c) Navrhněte základní nastavení: poměr objemů (retentát : dialyzát), kolik výměn dialyzátu uděláte (např. 2–3×), zda míchat/chladit.
d)Vypište co pohlídat (aspoň 5 bodů): např. změny pH/iontové síly, teplotu, míchání bez pěny, adsorpci proteinu na membránu, diluci/koncentraci objemu, kontaminaci endotoxiny apod.
e)Jak poznáte konec: uveď 2–3 měřitelné indikátory (např. konduktivita ≈ konduktivita dialyzátu, HPLC/UV malého analytu, stabilita proteinu na SDS-PAGE).
f) Krátký řádový odhad: když uděláte 3 výměny s poměrem 1 : 10 (retentát : dialyzát), jak moc zbyde malých molekul?
(Nápověda: pro ideální rychlou výměnu platí zhruba Cpo/Cpred ≈ (Vret/(Vret+Vdial))n — sem napište číslo.)
Máte směs proteinu (≈50 kDa) a malého inhibitoru (≈100 Da). Chcete inhibitor odstranit dialýzou.
a) Zvolte membránu (MWCO) a jednou větou zdůvodni výběr.
b) Nakreslete jednoduché schéma (sáček ↔ dialyzát) a napište, co je driving force.
c) Navrhněte základní nastavení: poměr objemů (retentát : dialyzát), kolik výměn dialyzátu uděláte (např. 2–3×), zda míchat/chladit.
d)Vypište co pohlídat (aspoň 5 bodů): např. změny pH/iontové síly, teplotu, míchání bez pěny, adsorpci proteinu na membránu, diluci/koncentraci objemu, kontaminaci endotoxiny apod.
e)Jak poznáte konec: uveď 2–3 měřitelné indikátory (např. konduktivita ≈ konduktivita dialyzátu, HPLC/UV malého analytu, stabilita proteinu na SDS-PAGE).
f) Krátký řádový odhad: když uděláte 3 výměny s poměrem 1 : 10 (retentát : dialyzát), jak moc zbyde malých molekul?
(Nápověda: pro ideální rychlou výměnu platí zhruba Cpo/Cpred ≈ (Vret/(Vret+Vdial))n — sem napište číslo.)