kalibrační roztoky
1)
Princip stanovení:
Stanovení obsahu fenolických látek je založeno na jejich reakci s činidlem dle Folin-Ciocalteua (kyselý roztok fosforečnanu molybdenového a wolframového – žluté zbarvení). V přítomnosti činidla dochází v alkalickém prostředí k rychlé oxidaci fenolických látek za vzniku modře zabarveného molybdeno-wolframového komplexu. Obsah fenolických látek je pak určen spektrofotometricky na základě absorbance při 765 nm za pomocí metody kalibrační přímky.
Pracovní postup:
Nejprve připravte kalibrační roztoky kyseliny gallové. Do 100 ml odměrné baňky připravte základní roztok o koncentraci 500 μg/ml v 95% etanolu. Z tohoto základního roztoku připravte kalibrační řadu o koncentracích 5, 10, 25, 50, 100 a 150 μg/ml do 10 ml odměrných baněk a vše doplňte destilovanou vodou po rysku
2)
Princip stanovení:
Vhodně naředěný roztok vzorku se přidá k čerstvě připravenému roztoku DPPH (2,2´-difenyl-1-pikrylhydrazyl) radikálu. Při vlnové délce 517 nm se sleduje úbytek absorbance, přičemž dochází k odbarvování fialového roztoku DPPH radikálu (zcela redukovaný roztok DPPH je žlutě zabarvený) vlivem antioxidačních látek obsažených ve vzorku. Výsledky jsou na základě spektrofotometrické analýzy při 517 nm vyjadřovány jako % inhibice DPPH radikálu. Druhou možností je vyjadřování výsledků ve formě TEAC (Trolox Equivalent Antioxidant Capacity). Trolox (6-hydroxy-2,5,7,8-tetramethylchroman-2-karboxylová kyselina) je relativně rozpustný analog vitaminu E.
Pracovní postup:
Nejprve připravte kalibrační roztoky látky Trolox. Do 100 ml odměrné baňky připravte základní roztok o koncentraci 250 μg/ml v 95% etanolu. Z tohoto základního roztoku připravte kalibrační řadu o koncentracích 5, 10, 15, 20 a 25 μg/ml do 10 ml odměrných baněk a vše doplňte destilovanou vodou po rysku.
Vzorky: Pro analýzu opět použijte vzorky A i B (viz úkol 1). Do 10 ml odměrné baňky odměřte 1 ml příslušného vzorku a doplňte destilovanou vodou po rysku. Z takto připraveného vzorku pipetujte 500 μl do zkumavky s 5 ml methanolického roztoku DPPH radikálu (o koncentraci 25 μg/ml) a ponechte 10 minut reagovat na temném místě při laboratorní teplotě. Přesně po 10 minutách změřte úbytek absorbance při 517 nm.
Prosím nevím si s tím rady.
Princip stanovení:
Stanovení obsahu fenolických látek je založeno na jejich reakci s činidlem dle Folin-Ciocalteua (kyselý roztok fosforečnanu molybdenového a wolframového – žluté zbarvení). V přítomnosti činidla dochází v alkalickém prostředí k rychlé oxidaci fenolických látek za vzniku modře zabarveného molybdeno-wolframového komplexu. Obsah fenolických látek je pak určen spektrofotometricky na základě absorbance při 765 nm za pomocí metody kalibrační přímky.
Pracovní postup:
Nejprve připravte kalibrační roztoky kyseliny gallové. Do 100 ml odměrné baňky připravte základní roztok o koncentraci 500 μg/ml v 95% etanolu. Z tohoto základního roztoku připravte kalibrační řadu o koncentracích 5, 10, 25, 50, 100 a 150 μg/ml do 10 ml odměrných baněk a vše doplňte destilovanou vodou po rysku
2)
Princip stanovení:
Vhodně naředěný roztok vzorku se přidá k čerstvě připravenému roztoku DPPH (2,2´-difenyl-1-pikrylhydrazyl) radikálu. Při vlnové délce 517 nm se sleduje úbytek absorbance, přičemž dochází k odbarvování fialového roztoku DPPH radikálu (zcela redukovaný roztok DPPH je žlutě zabarvený) vlivem antioxidačních látek obsažených ve vzorku. Výsledky jsou na základě spektrofotometrické analýzy při 517 nm vyjadřovány jako % inhibice DPPH radikálu. Druhou možností je vyjadřování výsledků ve formě TEAC (Trolox Equivalent Antioxidant Capacity). Trolox (6-hydroxy-2,5,7,8-tetramethylchroman-2-karboxylová kyselina) je relativně rozpustný analog vitaminu E.
Pracovní postup:
Nejprve připravte kalibrační roztoky látky Trolox. Do 100 ml odměrné baňky připravte základní roztok o koncentraci 250 μg/ml v 95% etanolu. Z tohoto základního roztoku připravte kalibrační řadu o koncentracích 5, 10, 15, 20 a 25 μg/ml do 10 ml odměrných baněk a vše doplňte destilovanou vodou po rysku.
Vzorky: Pro analýzu opět použijte vzorky A i B (viz úkol 1). Do 10 ml odměrné baňky odměřte 1 ml příslušného vzorku a doplňte destilovanou vodou po rysku. Z takto připraveného vzorku pipetujte 500 μl do zkumavky s 5 ml methanolického roztoku DPPH radikálu (o koncentraci 25 μg/ml) a ponechte 10 minut reagovat na temném místě při laboratorní teplotě. Přesně po 10 minutách změřte úbytek absorbance při 517 nm.
Prosím nevím si s tím rady.
Odpovědi
Diskuze
2) 0,2 ml , 0,4 ml , 0,6 ml , 0,8 ml , 1 ml
Mám to dobře?
Jak mám vypočítat ten základní roztok z čeho se budou pipetovat ty kalibrační roztoky?
2: zásobní roztok, tentokrát ale s poloviční navážkou látky Trolox (0,025g) opět převedeš do 100cm3 odměrné baňky, rozpustíš a doplníš po rysku. Pipetování je opět dobře.