Imunofluorescence, protokol
Při imunofluorescenční detekci proteinu iNOS v buněčné kultuře stimulovaných myších makrofágů produkujících významné množství oxidu dusnatého nebyl zaznamenán žádný signál. Výzkumník použil následující protokol:
1. fixace buněk, proplach
2. blokování
3. inkubace s primární protilátkou, proplach
4. inkubace se sekundární protilátkou, proplach
5. montování do média s DAPI
Která z nabízených možností byla s nejvyšší pravděpodobností příčinou výzkumníkova nezdaru?
Vyberte jednu z nabízených možností:
a. Výzkumník do protokolu chybně zařadil proplachovací kroky. Ty způsobily narušení slabých vazeb mezi proteinem iNOS a protilátkami, které byly ze vzorku odmyty.
b. Výzkumník opomněl buňky permeabilizovat, a tak se protilátky nemohly k proteinu iNOS dostat a navázat se na něj.
c. Výzkumník do protokolu chybně zařadil krok blokování, v důsledku čehož došlo k zakrytí proteinu iNOS blokovacím činidlem.
d. Výzkumník buňky fixoval příliš dlouho, což vedlo k úplnému vymytí proteinu iNOS z buněk.
Zdravím :) Doufám, že jsou tu nějací zdatní biologové, protože s touhle úlohou mám trošku trable. Nemůžu najít, co to znamená "blokování" a tak vůbec mi přijde, že všechno dává smysl... (jen možná d. to nebude). Budu vděčná i za spekulace, díky :).
1. fixace buněk, proplach
2. blokování
3. inkubace s primární protilátkou, proplach
4. inkubace se sekundární protilátkou, proplach
5. montování do média s DAPI
Která z nabízených možností byla s nejvyšší pravděpodobností příčinou výzkumníkova nezdaru?
Vyberte jednu z nabízených možností:
a. Výzkumník do protokolu chybně zařadil proplachovací kroky. Ty způsobily narušení slabých vazeb mezi proteinem iNOS a protilátkami, které byly ze vzorku odmyty.
b. Výzkumník opomněl buňky permeabilizovat, a tak se protilátky nemohly k proteinu iNOS dostat a navázat se na něj.
c. Výzkumník do protokolu chybně zařadil krok blokování, v důsledku čehož došlo k zakrytí proteinu iNOS blokovacím činidlem.
d. Výzkumník buňky fixoval příliš dlouho, což vedlo k úplnému vymytí proteinu iNOS z buněk.
Zdravím :) Doufám, že jsou tu nějací zdatní biologové, protože s touhle úlohou mám trošku trable. Nemůžu najít, co to znamená "blokování" a tak vůbec mi přijde, že všechno dává smysl... (jen možná d. to nebude). Budu vděčná i za spekulace, díky :).