Enzymologie příklad
NEvíte jak vypočítat tento příklad? Jsem bezradný...
http://orion.chemi.muni.cz/pskl/vyuka/enzym/enzym_04.htm (příklad 4.4)
4.4. Extrakt z lidské placenty má schopnost oxidovat různé diaminy (např. kadaverin) i monoaminy (např. histamin). Purifikace příslušného enzymu probíhala v následujících krocích:
1) Z 9620 cm3 extraktu byl síranem amonným vysrážen protein do 65% nasycení a sediment byl rozpuštěn v 3000 cm3 pufru.
2) Srážení síranem amonným bylo opakováno (35 - 65% nasycení), sediment byl rozpuštěn v 223 cm3 pufru.
3) Roztok enzymu získaný v 2) byl chromatografován na koloně s DEAE celulosou; aktivní frakce byla obsažena v 344 cm3 eluátu.
4) Předchozí frakce byla chromatografována na fosfocelulose; aktivní frakce eluátu měla objem 440 cm3.
5) Po zahuštění pomocí polyethylenglykolu byl enzymový preparát podroben gelové filtraci na Sephadexu G-200; aktivní frakce byla obsažena ve 130 cm3 eluátu.
Ve výchozím extraktu i jednotlivých frakcích během preparace byly stanoveny enzymové aktivity s kadaverinem resp. histaminem jako substráty (udávané konvenční jednotky se vztahují k použité spektrofotometrické metodě měření). Ke srovnání koncentrací proteinu v jednotlivých frakcích sloužily hodnoty absorbance při vlnové délce 280 nm (A280).
frakce: výchozí (1) (2) (3) (4) (5)
A280: 12 17,8 47,6 11,5 1,06 1,16
aktivita, jednotky v 1 cm3 kadaverin: 4,8 11.9 971 356 105 364
aktivita, jednotky v 1 cm3 histidin: 4,75 6,8 155,4 81,9 22 76,5
Diskutujte průběhy specifických a celkových aktivit při purifikaci. Jaké lze určit závěry o počtu přítomných enzymů a jejich substrátové specifitě?
http://orion.chemi.muni.cz/pskl/vyuka/enzym/enzym_04.htm (příklad 4.4)
4.4. Extrakt z lidské placenty má schopnost oxidovat různé diaminy (např. kadaverin) i monoaminy (např. histamin). Purifikace příslušného enzymu probíhala v následujících krocích:
1) Z 9620 cm3 extraktu byl síranem amonným vysrážen protein do 65% nasycení a sediment byl rozpuštěn v 3000 cm3 pufru.
2) Srážení síranem amonným bylo opakováno (35 - 65% nasycení), sediment byl rozpuštěn v 223 cm3 pufru.
3) Roztok enzymu získaný v 2) byl chromatografován na koloně s DEAE celulosou; aktivní frakce byla obsažena v 344 cm3 eluátu.
4) Předchozí frakce byla chromatografována na fosfocelulose; aktivní frakce eluátu měla objem 440 cm3.
5) Po zahuštění pomocí polyethylenglykolu byl enzymový preparát podroben gelové filtraci na Sephadexu G-200; aktivní frakce byla obsažena ve 130 cm3 eluátu.
Ve výchozím extraktu i jednotlivých frakcích během preparace byly stanoveny enzymové aktivity s kadaverinem resp. histaminem jako substráty (udávané konvenční jednotky se vztahují k použité spektrofotometrické metodě měření). Ke srovnání koncentrací proteinu v jednotlivých frakcích sloužily hodnoty absorbance při vlnové délce 280 nm (A280).
frakce: výchozí (1) (2) (3) (4) (5)
A280: 12 17,8 47,6 11,5 1,06 1,16
aktivita, jednotky v 1 cm3 kadaverin: 4,8 11.9 971 356 105 364
aktivita, jednotky v 1 cm3 histidin: 4,75 6,8 155,4 81,9 22 76,5
Diskutujte průběhy specifických a celkových aktivit při purifikaci. Jaké lze určit závěry o počtu přítomných enzymů a jejich substrátové specifitě?